壹(yi)篇(pian)看懂(dong)液相(xiang)色譜(pu)柱的(de)分(fen)類(lei)、選(xuan)擇(ze)及維護(hu)!

　　壹(yi)篇(pian)看懂(dong)液相(xiang)色譜(pu)柱的(de)分(fen)類(lei)、選(xuan)擇(ze)及維護(hu)!
 

　　1.矽(gui)膠(jiao)基(ji)質
 

　　1.1反相(xiang)色譜(pu)柱：反(fan)相(xiang)色譜(pu)填料(liao)常是(shi)以(yi)矽(gui)膠為基礎(chu)，表(biao)面(mian)鍵(jian)合(he)有(you)極(ji)性(xing)相(xiang)對較(jiao)弱(ruo)的(de)官能(neng)團的(de)鍵(jian)合(he)相(xiang)。反相(xiang)色譜(pu)所使(shi)用(yong)的(de)流(liu)動(dong)相(xiang)極(ji)性(xing)較(jiao)強，通常為水，緩(huan)沖(chong)液與(yu)甲醇(chun)，已腈(jing)等(deng)混合(he)物(wu)。樣品流(liu)出(chu)色(se)譜(pu)柱的(de)順序(xu)是(shi)極(ji)性(xing)較(jiao)強組合(he)最(zui)先(xian)被(bei)沖(chong)出，而極(ji)性(xing)弱(ruo)的(de)組份會在色(se)譜(pu)柱上有(you)更強(qiang)的(de)保留(liu)。常用(yong)的(de)反相(xiang)填料(liao)有(you)C18(ODS)、C8(MOS)、C4(B)、C6H5(Phenyl)等(deng)。
 

　　1.2正相(xiang)色譜(pu)：正相(xiang)色譜(pu)用(yong)的(de)固(gu)定(ding)相(xiang)通常為矽膠(jiao)(Silica)，以(yi)及其(qi)他(ta)具有(you)極(ji)性(xing)官(guan)能(neng)團(tuan)，如胺基團(tuan)(NH2,APS)和氰(qing)基(ji)團(CN，CPS)的(de)鍵(jian)合(he)相(xiang)填料(liao)。由(you)於(yu)矽膠表(biao)面(mian)的(de)矽羥(qiang)基(SiOH)或(huo)其(qi)他(ta)團(tuan)的(de)極(ji)性(xing)較(jiao)強，因(yin)此，分(fen)離(li)的(de)次序(xu)是(shi)依據樣(yang)品中(zhong)的(de)各組份的(de)極(ji)性(xing)大小(xiao)，即極(ji)性(xing)強(qiang)弱(ruo)的(de)組份最先(xian)被(bei)沖(chong)洗出(chu)色(se)譜(pu)柱。正(zheng)相(xiang)色譜(pu)使(shi)用(yong)的(de)流(liu)動(dong)相(xiang)極(ji)性(xing)相(xiang)對比(bi)固(gu)定(ding)相(xiang)低，如(ru)：正乙(yi)烷(wan)(Hexane),氯仿(Chloroform),二(er)氯甲烷(MethyleneChloride)等(deng)。
 

　　1.3離(li)子(zi)交換色譜(pu)柱：以(yi)磺化(hua)交(jiao)聯強陰/陽(yang)離(li)子(zi)鍵(jian)合(he)矽(gui)膠色譜(pu)柱，常用(yong)規(gui)格：強(qiang)陰離(li)子(zi)色譜(pu)柱(SAX)，強(qiang)陽(yang)離(li)子(zi)交換色譜(pu)柱(SCX)
 

　　2.聚(ju)合(he)物(wu)基質:聚合(he)物(wu)調(tiao)料多為聚苯乙烯(xi)-二(er)乙烯(xi)基苯或(huo)聚甲基丙(bing)酸(suan)酯等(deng)，其(qi)主(zhu)要優(you)點(dian)是(shi)在PH值(zhi)為1～14均可(ke)使(shi)用(yong)。相(xiang)對與(yu)矽(gui)膠(jiao)基(ji)質的(de)C18填料(liao)，這類填料(liao)具有(you)更強(qiang)的(de)疏(shu)水性(xing)；大孔的(de)聚合(he)物(wu)填料對蛋(dan)白質等(deng)樣品的(de)分(fen)離(li)非(fei)常有(you)效(xiao)。現在的(de)聚合(he)物(wu)填料的(de)缺點是(shi)相(xiang)對矽(gui)膠(jiao)基(ji)質填料(liao)，色譜(pu)柱柱(zhu)效(xiao)較(jiao)低。
 

　　所(suo)有(you)聚合(he)物(wu)基質在流(liu)動(dong)相(xiang)發生(sheng)變(bian)化(hua)時(shi)都(dou)會出現(xian)膨脹或(huo)收(shou)縮。用(yong)於HPLC的(de)高(gao)交(jiao)聯(lian)度(du)聚(ju)合(he)物(wu)填料，其(qi)膨脹和收(shou)縮要有(you)限制(zhi)。溶(rong)劑(ji)或(huo)小分(fen)子(zi)容(rong)易(yi)滲入(ru)聚(ju)合(he)物(wu)基質中，因(yin)為小分(fen)子(zi)在聚(ju)合(he)物(wu)基質中的(de)傳質(zhi)比在陶(tao)瓷性(xing)基(ji)質(zhi)中(zhong)慢，所(suo)以(yi)造(zao)成(cheng)小分(fen)子(zi)在這種基(ji)質中(zhong)柱(zhu)效(xiao)低。對(dui)於大分(fen)子(zi)像(xiang)蛋(dan)白質或(huo)合(he)成(cheng)的(de)高(gao)聚(ju)物(wu)，聚(ju)合(he)物(wu)基質的(de)效(xiao)能比得上陶瓷性(xing)基(ji)質(zhi)。因(yin)此，聚(ju)合(he)物(wu)基質廣(guang)泛(fan)用(yong)於分(fen)離(li)大分(fen)子(zi)物(wu)質(zhi)。
   

　　3.其(qi)他(ta)無(wu)機(ji)填(tian)料(liao):其(qi)它HPLC的(de)無(wu)機(ji)填(tian)料(liao)色(se)譜(pu)柱也(ye)已(yi)經商(shang)品化(hua)。
 

　　由(you)於其(qi)特(te)殊的(de)性質(zhi)，壹(yi)般僅(jin)限於(yu)特殊的(de)用(yong)途(tu)。如(ru)石(shi)墨化(hua)碳(tan)也用(yong)於正逐漸成(cheng)為反相(xiang)色譜(pu)填料(liao)。這種填(tian)料的(de)分(fen)離(li)不(bu)同(tong)與(yu)矽(gui)膠(jiao)基(ji)質烷基鍵(jian)合(he)相(xiang)，石墨化(hua)碳(tan)的(de)表(biao)面(mian)即是(shi)保留(liu)的(de)基礎(chu)，不(bu)再需(xu)其(qi)它的(de)表(biao)面(mian)改(gai)性(xing)，該(gai)柱填(tian)料壹(yi)般比(bi)烷(wan)基鍵(jian)合(he)矽(gui)膠或(huo)多孔聚合(he)物(wu)填料的(de)保留(liu)能(neng)力(li)更(geng)強，石墨化(hua)碳(tan)可用(yong)於分(fen)離(li)某些幾(ji)何(he)導(dao)構體(ti)，又由於HPLC流(liu)動(dong)相(xiang)中不(bu)會被(bei)溶(rong)解，這類柱可(ke)在任何PH與(yu)溫(wen)度(du)下(xia)使(shi)用(yong)。
 

　　氧(yang)化(hua)鋁(lv)也可用(yong)於HPLC，氧(yang)化(hua)鋁(lv)微粒(li)剛(gang)性強(qiang)，可(ke)制(zhi)成(cheng)穩定(ding)的(de)色譜(pu)柱柱(zhu)床(chuang)，其(qi)優(you)點(dian)是(shi)可在PH高(gao)達(da)12的(de)流(liu)動(dong)相(xiang)中使(shi)用(yong)。
 

　　但由於氧(yang)化(hua)鋁(lv)與(yu)堿(jian)性(xing)化(hua)合(he)物(wu)作用(yong)也很強，應(ying)用(yong)範(fan)圍受(shou)到壹(yi)定(ding)的(de)限制(zhi)，所以(yi)未(wei)能(neng)廣(guang)泛(fan)應(ying)用(yong)，新(xin)型(xing)氧(yang)化(hua)鋯(gao)填料也(ye)可用(yong)於HPLC，商品化(hua)的(de)僅(jin)有(you)聚合(he)物(wu)塗層(ceng)的(de)多孔氧(yang)化(hua)鋯(gao)微球色譜(pu)柱，應(ying)用(yong)PH範(fan)圍1～14，溫(wen)度(du)可達(da)100℃。由於氧(yang)化(hua)鋯(gao)填料幾(ji)年(nian)才(cai)開(kai)始研究，加之面臨(lin)的(de)實(shi)驗(yan)難(nan)度，其(qi)重要用(yong)途(tu)與(yu)優(you)勢尚在進(jin)行(xing)中。
 

　　二(er).色譜(pu)柱的(de)選擇(ze)
 

　　液相(xiang)色譜(pu)儀基質的(de)選擇(ze)大致(zhi)遵(zun)循以(yi)下(xia)法則，矽(gui)膠(jiao)基質(zhi)的(de)填料(liao)被(bei)用(yong)於大部分(fen)的(de)HPLC分(fen)析(xi)，尤(you)其(qi)是(shi)小分(fen)子(zi)量(liang)的(de)被(bei)分(fen)析(xi)物，聚(ju)合(he)物(wu)填料用(yong)於大分(fen)子(zi)量(liang)的(de)被(bei)分(fen)析(xi)物質(zhi)，主(zhu)要用(yong)來(lai)制成(cheng)分(fen)子(zi)排(pai)阻(zu)和離(li)子(zi)交換柱。
 

　　色(se)譜(pu)柱在使(shi)用(yong)前，最好(hao)進行(xing)柱的(de)性能(neng)測試，並將(jiang)結果保存起(qi)來(lai)，作為今(jin)後(hou)評(ping)價柱(zhu)性(xing)能變(bian)化(hua)的(de)參考。在做(zuo)柱性(xing)能測試時(shi)要按(an)照色譜(pu)柱出(chu)廠報告中(zhong)的(de)條件(jian)進行(xing)(出廠測試所(suo)使(shi)用(yong)的(de)條件(jian)是(shi)最佳條(tiao)件(jian))，只(zhi)有(you)這樣，測得的(de)結果才有(you)可比(bi)性。但(dan)要註(zhu)意(yi)：柱(zhu)性(xing)能(neng)可(ke)能由(you)於所(suo)使(shi)用(yong)的(de)樣品、流(liu)動(dong)相(xiang)、柱溫(wen)等(deng)條件(jian)的(de)差(cha)異(yi)而有(you)所不(bu)同(tong)。
 

　　三.色(se)譜(pu)柱的(de)維護(hu)
 

　　1.色(se)譜(pu)柱的(de)平衡
 

　　反相(xiang)色譜(pu)柱由(you)工廠測試後(hou)是(shi)保存在乙(yi)腈(jing)/水中(zhong)的(de)。新(xin)柱應(ying)先(xian)使(shi)用(yong)10-20倍柱體積(ji)的(de)甲醇(chun)或(huo)乙腈(jing)沖(chong)洗色(se)譜(pu)柱。請壹(yi)定(ding)確(que)保(bao)您分(fen)析(xi)樣品所(suo)使(shi)用(yong)的(de)流(liu)動(dong)相(xiang)和乙(yi)腈(jing)/水互(hu)溶(rong)。每天(tian)用(yong)足(zu)夠(gou)的(de)時(shi)間(jian)以(yi)流(liu)動(dong)相(xiang)來(lai)平衡色譜(pu)柱，您(nin)就(jiu)會在處理(li)問題(ti)方(fang)面(mian)獲(huo)得最(zui)大的(de)"補償(chang)"，
 

　　2.色(se)譜(pu)柱的(de)再生(sheng),長(chang)期使(shi)用(yong)的(de)色譜(pu)柱，往(wang)往(wang)柱(zhu)效(xiao)會下降(jiang)(柱子的(de)理(li)論塔(ta)板(ban)數(shu)減(jian)低)。可(ke)以(yi)對(dui)色譜(pu)柱進(jin)行(xing)再生(sheng)，在有(you)條件(jian)的(de)實(shi)驗(yan)室(shi)應(ying)使(shi)用(yong)壹(yi)個廉價的(de)泵進(jin)行(xing)柱子(zi)的(de)再生(sheng)。
 

　　建(jian)議(yi)用(yong)來(lai)沖(chong)洗柱(zhu)子(zi)的(de)溶(rong)劑(ji)體(ti)積(ji)
 

　　3.色譜(pu)柱的(de)維護(hu)
 

　　a.使(shi)用(yong)預柱(zhu)保(bao)護(hu)分(fen)析(xi)柱(矽(gui)膠(jiao)在極(ji)性(xing)流(liu)動(dong)相(xiang)/離(li)子(zi)性流(liu)動(dong)相(xiang)中有(you)壹(yi)定(ding)的(de)溶(rong)解度(du))
 

　　b.大多數(shu)反相(xiang)色譜(pu)柱的(de)pH穩定(ding)範(fan)圍是(shi)2-7.5，盡量(liang)不(bu)超過該(gai)色(se)譜(pu)柱的(de)pH範(fan)圍
 

　　c.避(bi)免(mian)流(liu)動(dong)相(xiang)組成(cheng)及極(ji)性(xing)的(de)劇烈(lie)變化(hua)
 

　　d.流(liu)動(dong)相(xiang)使(shi)用(yong)前必(bi)須(xu)經脫氣和過濾(lv)處理(li)
 

　　e.如果(guo)使(shi)用(yong)極(ji)性(xing)或(huo)離(li)子(zi)性的(de)緩(huan)沖(chong)溶(rong)液作(zuo)流(liu)動(dong)相(xiang)，應(ying)在實(shi)驗(yan)完(wan)畢(bi)柱子(zi)沖(chong)洗幹凈(jing)，並保(bao)存(cun)於甲醇(chun)或(huo)乙腈(jing)中
 

　　f.氯化(hua)物(wu)的(de)溶(rong)劑(ji)對(dui)其(qi)有(you)壹(yi)定(ding)的(de)腐(fu)蝕性，故(gu)使(shi)用(yong)時(shi)要註(zhu)意(yi)，柱(zhu)及連接管(guan)內不(bu)能(neng)長(chang)時(shi)間(jian)存(cun)留(liu)此類(lei)溶(rong)劑(ji)，以(yi)避(bi)免腐(fu)蝕。